domingo, 19 de febrero de 2012

Desintoxicación

MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 89
Guia Didactica: Ecotoxicologia
Las sustancias que inhiben la sintesis de Citocromo P-450 tambien pudieran servir
de antidoto si la especie toxica es producto de la bioactivacion del xenobiotico por
el Citocromo P-450.
R - OH ................ UDPG R - O - G
Glucoronidacion R - NH2 R - NH - G
R - SH UDPG Transferasa R - S - G
R - OH SAM R - O -SO2
Sulfatacion R - NH2 Sulfotransferasa R - NH - SO2
Aminoacidacion R - COOH + H2N - CH2 - COOH R - CO - NH - CH2- COOH
Glutationizacion R - CH - CH2 GS R - CH2 - CH - OH
SG - CH2
O
Metilacion R - OH SAM R - O - CH3
Acetilacion RNH2 Acetil -CoA RNH - COCH3
N acetilTransferasa
Figura 1.7 Reacciones de Conjugacion de Fase II
Las rutas de Bioactivacion son las siguientes:
1. El tejido blanco contiene las enzimas para bioactivar el xenobiotico y es el sitio
activo para la especie toxica. El ejemplo clasico de esta ruta es la bioactivacion del
tetracloruro de carbono via la deshalogenacion por el P-450 del higado, produciendo
el radical libre triclorometilo, el cual reacciona con proteinas y lipidos del higado.
2. Un tejido no blanco bioactiva al xenobiotico, el cual experimenta otra bioactivacion
en el tejido blanco. Ejemplo, el benceno es oxidado a fenol por los P-450 del higado
y este compuesto se transporta hasta la medula osea donde se transforma en
hidroquinol, un diol que causa dano en la medula osea.
3. Un tejido no-blanco bioactiva el xenobiotico, el cual tiene sus efectos en el tejido
blanco.
Ejemplo: el hexano se transforma en 2,5-hexanodiona por la accion del P-450 y la
alcohol deshidrogenasa del higado. Este metabolito produce ligaduras cruzadas
en los neurofilamentos causando dano en nervios perifericos.
90 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
Broactivacion del Benceno.
OH OH
Benceno Fenol OH
Hidroquinol
Bioactivacion del Benzopireno
P - 450
Hidrolasa de
Epoxido
P - 450
OH OH
OH OH
Figura 1.8 Ejemplo de reacciones de bioactivacion
* Excrecion: Los toxicos generalmente se eliminan por los rinones, con las heces
fecales y con los pulmones.
Orina
Los rinones son los organos mas importantes en la excrecion ya que directamente
remueven las sustancias toxicas de la sangre. Para que una sustancia sea eliminada
por la orina es necesario que sea soluble en agua. Los compuestos liposolubles se
tienen que biotransformar en hidrosolubles para poder ser excretados por esta via.
La excrecion esta fuertemente influenciada por las propiedades fisicoquimicas del
excretando, las bases debiles pueden excretarse en la orina debido al pH de la
orina, aunque los rinones tambien pueden excretar activamente aniones y cationes
organicos.
Heces
Las heces son otra ruta importante de excrecion. Consisten de la ingesta no
absorbida, secreciones biliares, secreciones intestinales y microflora. Cualquier
dosis oral que no se absorbe se elimina con las heces y no existe la absorcion
100%. La flora microbiana puede bioacumular compuestos y como parte de ella es
eliminada en las heces, esto contribuye a la excrecion de toxicos. Hay tambien una
pequena contribucion de la difusion pasiva de algunos compuestos de la sangre al
intestino.
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 91
Guia Didactica: Ecotoxicologia
Bilis
La bilis contribuye a la excrecion de los metabolitos formados en el higado. Las
sustancias con peso molecular mayor a 350 se excretan mas facilmente por esta via.
Algunos iones metalicos, acidos organicos, bases organicas y compuestos neutros
se pueden transferir a la bilis por medio de transporte activo. Una vez formada
la bilis pasa al intestino para ser excretada con las heces. La microflora intestinal
biotransforma algunos compuestos que van en la bilis y los metabolitos resultantes
pueden ser reabsorbidos y llevados de nuevo al higado. Este fenomeno, como se
menciono anteriormente, se conoce como el ciclo enterohepatico y es la causa de
que se incremente la permanencia del toxico en el organismo.
Aire exhalado
Asi como los compuestos pueden ser inhalados tambien pueden ser exhalados.
Para que esto ocurra el compuesto debe de ser un gas a temperatura corporal.
Los liquidos volatiles estan en equilibrio con su fase vapor en los alveolos. La
transferencia de la sangre a los pulmones tiene lugar por difusion pasiva y es
inversamente proporcional a su velocidad de absorcion.
La baja solubilidad en sangre permite una excrecion rapida y excrecion limitada
por la perfusion (flujo de sangre), mientras que para los compuestos con una alta
solubilidad en sangre su excrecion esta limitada por la ventilacion.
Otros mecanismos
Las secreciones corporales, como la leche, el sudor y la saliva constituyen vias
menores de excrecion de toxicos.
La leche constituye una via importante en el caso de transporte de toxicos de la
madre lactante al hijo y del ganado lechero al hombre. El pH ligeramente menor
de la leche, con respecto al plasma, facilita la excrecion de algunos compuestos
basicos pero tambien se pueden excretar algunos compuestos liposolubles y iones
similares al calcio.
En el sudor y en la saliva se pueden excretar compuestos liposolubles no disociados que
en el caso del sudor, pueden causar dermatitis y en caso de la saliva se vuelven a deglutir
y empieza de nuevo el ciclo de absorcion, distribucion, metabolismo y excrecion.
La interaccion dinamica de todos los procesos que constituyen el ADME (Absorcion,
Distribucion, Metabolismo y Excrecion) determina el tiempo que permanecera un
agente dentro del organismo despues de que este ha sido expuesto a una dosis
determinada. Al estudio de la velocidad de cambio de la concentracion de las
especies toxicas dentro del organismo se le conoce como toxicocinetica.
Las tasas de cambio que se presentan en cada fase del ADME se pueden modelar
matematicamente e integrarlas en un modelo que represente la dinamica global
del toxico dentro del organismo.
Cada proceso, sea este de cambio de lugar y/o de identidad quimica, se puede
representar por una ecuacion diferencial en la que la derivada de la concentracion
con respecto al tiempo en un sitio determinado, se expresa como una funcion de
la concentracion en ese lugar. La constante de proporcionalidad se denomina
velocidad especifica y normalmente se representa por la letra k.
92 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
Figura 1.9 Proceso ADME a traves del organismo
Podemos representar al cuerpo por un modelo de un solo compartimiento que sigue una
cinetica de primer orden si se supone que se llega rapidamente al equilibrio en la interfase
sangre-tejido. En este caso, el cambio de concentracion en plasma refleja el cambio de
concentracion en los tejidos. Este modelo establece que la velocidad de eliminacion
de un compuesto, en un momento dado, solo es proporcional a su concentracion. La
variable eliminacion incluye la expulsion del compuesto por todas las rutas de excrecion
y la desaparicion por biotransformacion. La cinetica de primer orden se representa
matematicamente de la siguiente manera:
dC/dt = - kelC
Donde:
C= concentracion plasmatica
kel= constante de velocidad de eliminacion de primer orden
t = tiempo al que se muestreo la sangre.
Este modelo indica que la velocidad global a la que procede el ADME de un compuesto
es directamente proporcional a la concentracion y que la velocidad no varia linealmente
con la dosis, sino que su variacion es exponencial. La velocidad de eliminacion es alta
cuando la dosis es alta, pero disminuye fuertemente a medida que la concentracion del
toxico disminuye.
Vida media es el tiempo que tarda el organismo en reducir a la mitad laconcentracion
del toxico.
Si un compuesto tiene una vida media de 24 horas y su concentracion en un momento
dado es 40 mg/L, en un dia se bajara la concentracion a 20 mg/L, pero bajar esta
concentracion otros 20 mg/L (bueno, casi 20 mg/L, digamos 19.8 mg/L) requerira de
mas de 6 dias.
MEDIO AMBIENTE
PIEL INTESTINO PULMONES
Absorcion
SANGRE
Otros Blanco Higado Rinones
Excrecion
Distribucion
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 93
Guia Didactica: Ecotoxicologia
La constante kel se puede elevar graficando la concentracion plasmatica contra el tiempo
en escala semilogaritmica. Se obtiene una linea recta con pendiente - kel.
La mayoria de los compuestos siguen una cinetica de primer orden, pero no todos, el
alcohol etilico sigue una cinetica orden cero, en la cual la velocidad de eliminacion es
independiente de la concentracion y solo es funcion del tiempo. La cinetica de orden cero
se presenta cuando se saturan las enzimas de un campo metabolico. Si la concentracion
de una agente es muy alta, se saturaran las enzimas y su eliminacion mostrara una
cinetica de orden cero aparente, auque a concentraciones no saturantes presente una
cinetica de primer orden. Por el contrario los compuestos que normalmente se eliminan
siguiendo una cinetica de orden cero, cuando las concentraciones son muy bajas, su
eliminacion sigue una cinetica de primer orden aparente. El modelo que representa la
cinetica de orden cero es:
dC/dt=ko
Donde k es la constante de velocidad de orden cero, C y t tienen el mismo significado
que en la ecuacion anterior.
Cuando se tiene dosis repetidas el nivel del toxico se aproxima a la concentracion de
estado estacionario porque las velocidades de eliminacion y de absorcion son iguales.
Se necesitan aproximadamente 5 vidas medias para alcanzar el estado estacionario, asi
que los compuestos que se eliminan muy lentamente tardan mucho en alcanzarlo.
El calculo de la concentracion en estado estacionario se hace con la siguiente ecuacion:
C*=FD/tTs
Donde: C* es la concentracion en el estado estacionario;
D es la dosis;
F biodisponibilidad o fraccion de la dosis absorbida;
Ts es el tiempo de residencia en el organismo y t es el intervalo entre dosis.
1.4.12 RELACION DOSIS . EFECTO Y DOSIS . RESPUESTA
La relacion dosis - efecto
es la que existe entre la
dosis administrada y
severidad de un efecto
especifico
La relacion dosis -
respuesta es la relacion
que existe entre la dosis
administrada y el numero
de individuos expuestos
que presentan un efecto
que puede describirse y
cuantificable
La mayoria de los estudios de la relacion dosis/respuesta se ha hecho para determinar
los efectos terapeuticos de drogas en experimentos de tipo farmacologicos.
Lo que se denomina efecto o respuesta toxica es un cambio organico permanente que
debe de poder se medido en el componente bajo estudio y tener un valor de cero cuando
la dosis es cero la medicion puede hacerse a diferentes niveles; molecular, celular, organo,
organismo, pero independientemente del nivel, el efecto debe ser medible.
La magnitud y tipo de los efectos adversos producidos dependen de la duracion de la
exposicion
94 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
CURVA DOSIS RESPUESTA
La curva dosis-efecto se construye graficando en las ordenadas los Efectos (E) causados en
el organismo expuesto a una sustancia quimica y en las abscisas las Dosis (D) a las que fue
expuesto. Si la experimentacion se hizo con el tejido blanco aislado expuesto directamente a
la sustancia, la respuesta observada normalmente es una funcion hiperbolica de la dosis de
una forma similar a la ecuacion de MichaelisMenten para expresar la velocidad inicial de
una reaccion enzimatica. La curva pasa por el origen del sistema de coordenadas cartesianas
y la pendiente maxima se presenta en el origen. La pendiente permanece aproximadamente
constante durante un rango amplio de la dosis (cinetica de primer orden), despues la pendiente
disminuye con la dosis hasta que se vuelve cero (cinetica de orden cero) y la respuesta adquiere
su valor maximo. A este valor maximo se le denomina efecto maximo (Emax) y es una medida
de la eficacia del toxico. En algunas ocasiones, la relacion dosis-efecto no es tan definida y
dentro de una poblacion se observa una distribucion de respuestas para cada dosis. En este
caso el efecto que se mide no es la magnitud, se mide el porcentaje de la poblacion en estudio
que presenta una determinada respuesta para cada dosis suministrada. Este tipo de efecto se
le denomina cuantal. En estos casos se acostumbra graficar, en la ordenada, el por ciento de
la poblacion que presenta un determinado valor de la respuesta y en la abscisa, el logaritmo
de la dosis suministrada. Esta curva tiene forma sigmoidal.
La curva pasa por el origen (cuando la dosis es cero, la respuesta es cero) y a valores
muy bajos de la dosis, la curva -es horizontal con un valor del efecto igual a cero (la
curva va sobre el eje de las dosis). La respuesta empieza a tener un valor mayor que cero
cuando la dosis llega al nivel limite. De alli en adelante la pendiente de la curva crece
con la dosis, hasta que se llega a una pendiente maxima. Esta pendiente se mantiene por
un amplio rango de dosis en el que la respuesta es directamente proporcional a la dosis
(linea recta). A dosis mayores la pendiente empieza a decrecer hasta que la curva se
vuelve asintotica a un valor maximo de la respuesta (Emax).
A la region de la curva donde los efectos no son medibles (0 a 1), se le conoce como
region NOAEL (por sus siglas en ingles No Observed Adverse Effects Level). El numero
2 se conoce como el punto donde se observa el minimo efecto adverso, LOAEL (lowest
observed adverse effect level), el 3 corresponde con la region lineal y el 4 se identifica con
la Respuesta maxima (Emax).
Figura 1.10 Curva dosis . respuesta
0 1
2
3
4
% Efecto o
respuesta
Log Dosis
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 95
Guia Didactica: Ecotoxicologia
La region lineal de la curva abarca aproximadamente del 16 al 84% de la respuesta
maxima.
El valor de Emax es una medida de la eficacia del toxico o la droga. Algunas sustancias
presentan relaciones dosis-respuesta diferentes a la descrita y la curva no tiene la forma
de S.
Hay compuestos peligrosos que presentan dos curvas dosis-efecto, una curva que
representa efectos toxicos y otra los efectos letales. Cuando se aumenta el nivel de la
dosis, se pasa de una area de la curva en la que no se observan efectos daninos a otra
donde se observan efectos toxicos crecientes. Cuando se aumenta aun mas la dosis se
presentan los efectos letales crecientes que tambien se relacionan con la dosis en la misma
forma que los efectos anteriores. Las dos curvas son paralelas
Figura 1.11 Curva Dosis - respuesta. Presenta dos comportamlentos: 1 - Efectos toxicos, 2- Efectos letales
- Potencia vs. Eficacia
Potencia se refiere al rango de dosis dentro del cual una sustancia produce
respuestas crecientes. La curva del toxico (o droga) mas potente aparece mas
cercana al origen.
La potencia de un droga esta influenciada por factores tales como la absorcion, el
metabolismo, etc. La eficacia esta relacionada a una accion mas fundamental de
la droga, es una medida de la capacidad intrinseca de la droga para producir un
efecto. Este valor se estima midiendo la altura maxima de la curva dosis-respuesta
(cuando la curva se vuelve asintotica a las abscisas) y se le denomina Emax.
Dos drogas que son cualitativamente iguales en producir un efecto particular
pueden diferir en su eficacia, en su potencia, o en ambas . El compuesto 1 es mas
potente que el compuesto 2, y el compuesto 2 es mas potente que el compuesto 3;
los compuestos 1 y 2 tienen igual eficacia, pero, el compuesto 3 es menos eficaz que
1 y 2.
1 2
% Efecto o
respuesta
Log Dosis
DT 50 DL 50
96 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
Figura 1.12 Potencia y eficacia de tres compuestos
. Parametros Farmaco-toxicologicos
Para representar las curvas dosis-efecto por un numero se acostumbra, utilizar la
dosis que produce una respuesta igual a la mitad de Emax.
DE50. Si se trata de la curva dosis-efectos terapeuticos se le llama DE50 (Dosis
Efectiva, nivel 50%). Cuando se midieron efectos graduales la DE50 es la dosis que
produce una respuesta igual a la mitad de la respuesta maxima. Si se midieron
efectos cuantales, entonces la DE50 es la dosis que produce una respuesta deseable
determinada en el 50% de la poblacion.
Este parametro, se obtiene trazando, una linea horizontal del punto del 50% de
respuesta en la region lineal de la curva de dosis-efectos deseables; en el punto
de interseccion con la curva se traza una linea vertical. El punto en el cual la linea
intercepta la abscisa, es la DE50.
DL50. Cuando se quieren representar las curvas de efectos toxicos y letales se usa la
DL50 que es la dosis a la cual el 50% de la poblacion que recibe esa dosis muere. La
forma de calcular este parametro es identico al utilizado para obtener la DE50, pero
en este caso, se usa la curva de efectos letales. La DL50 no es una constante biologica
porque hay muchos factores que influyen en la toxicidad.
Indice terapetico, IT y Margen de seguridad, MS. Son numeros utiles en estudios
farmacologicos. El primero es el cociente que resulta de dividir la dosis requerida
para producir un efecto letal por la dosis requerida para producir un efecto deseado,
usualmente, se hace la comparacion de las dosis medias.
IT = DL50/DE50
El segundo se calcula dividiendo la DL1 (efectos letales en el 1% de la poblacion)
por la DE99 (efectos deseables en el 99% de la poblacion)
MS =DL1/DE99
1 2
% Efecto o
respuesta
Log Dosis
3
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 97
Guia Didactica: Ecotoxicologia
. Efecto toxico critico
Este es un parametro que se calcula despues de recopilar la informacion experimental
de buena calidad que se haya hecho con la sustancia para una via de exposicion
determinada.
Se conoce como estudio critico al experimento o conjunto de experimentos que
contienen los mejores datos de dosis-efecto de una sustancia para una via de
exposicion determinada. Para decidir cual es el mejor, se toman en cuenta los
siguientes atributos:
- Si existe algun buen estudio hecho en humanos, se selecciona como el estudio
critico.
- Si no se cuenta con buenos estudios en humanos, entonces se utiliza informacion
obtenida con animales, prefiriendose la que provienen de modelos en los que
el metabolismo de la sustancia es similar al que se observa en el hombre.
- En la ausencia de estudios, en especies que sea claramente relevantes, se
asume que los humanos son tan sensibles como los organismos mas sensibles
en los que se haya hecho experimentacion. El estudio con la especie mas
sensible (la especie que muestra un efecto toxico con la dosis administrada
mas baja) se selecciona como el estudio critico.
El nivel experimental mas bajo, en el estudio critico, en el que se observa que se
produce el efecto adverso, tambien llamado LOAEL (lowest observed adverse effect
level), despues de las conversiones dosimetricas para ajustar por las diferencias en
especie, se conoce como efecto toxico critico.
. NOAEL
NOAEL (Non Observed Adverse Effects Level) es el nivel de exposicion experimental
que representa el maximo nivel probado al cual no se observan efectos toxicos. Para el
proposito de evaluacion de riesgos este es el dato clave que se obtiene de los estudios
de Dosis - Respuesta. Si las exposiciones experimentales fueron intermitentes, se
corrige el valor del NOAEL para que representen exposiciones continuas
INDICES DE TOXICIDAD.
Los indices de toxicidad son los parametros toxicologicos que se utilizan en la evaluacion
de riesgos y se obtienen de los estudios de dosis-respuesta.
Se estiman en forma diferente los indices para cancerigenos y los indices para no
cancerigenos. Los valores de estos parametros son los que se comparan con las dosis
suministradas que se estiman en los estudios de exposicion a toxicos ambientales.
La mayoria de los valores publicados de los indices de toxicidad se calcularon en base a efectos
observados experimentalmente en exposiciones controladas de animales de laboratorio.
1.4.13 CRITERIOS DE PELIGROSIDAD
La peligrosidad se define como la caracteristica intrinseca de una sustancia mediante la
cual puede danar, contaminar o matar organismos. Los criterios de peligrosidad que se
usan mas comunmente son:
. Persistencia: Es la caracteristica de las sustancias que les permite resistir a la degradacion
fotoquimica, biologica y quimica, por lo cual su vida media en el ambiente es elevada
y pueden permanecer en el por periodos largos. Cuanto mas persistente sea una
sustancia, mas peligrosa sera.
98 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
. Movilidad ambiental: Es la capacidad de movimiento de la sustancia a traves del
ecosistema.
. Bioconcentracion: Algunas sustancias tiene mas afinidad por los tejidos organicos
que por el agua, por lo que pueden encontrarse en concentraciones mas elevadas
en esos organismos que en el agua.
. Bioacumulacion: Sucede cuando la concentracion de una sustancia aumenta en el
organismo expuesto en funcion del tiempo.
. Factor de bioconcentracion: La capacidad de bioconcentracion y de bioacumulacion
se mide por medio del factor de bioconcentracion (BCF). Es la relacion entre la
concentracion de la sustancia quimica que ha sido absorbida por el organismo y la
concentracion de la misma sustancia en el agua.
. Coeficiente de particion octanol - agua: La distribucion de la sustancia entre el
agua y el suelo, el agua y el aire o el agua y los organismos se mide mediante un
coeficiente de particion. Entre los que mas se utilizan esta el coeficiente de particion
octanol-agua (Kow), el cual se determina utilizando n-octanol como equivalente
de la fase ambiental organica. Las sustancias que tienen log Kow mayores de 4.3
pueden incorporarse facilmente en las cadenas troficas. La relacion entre el BCF y
el Kow es la siguiente:
Log BCF = 0.893 log Kow + 0.607
. Biomagnificacion: Algunas sustancias pueden ser concentradas sucesivamente en
cada eslabon de la cadena trofica.
. Transformaciones en el ambiente: Muchos productos se transforman en el ambiente para
dar origen a sustancias mucho mas persistentes y/o mas toxicas que las originales.
. Efectos biologicos adversos: Los efectos de los contaminantes pueden ser de muy
distintos tipos y ocurrir sobre sistemas muy diferentes.
. Efectos fisicos y quimicos: Algunos factores pueden afectar algun parametro
abiotico del medio, por ejemplo: la temperatura, la precipitacion pluvial o la
disponibilidad de nutrientes. Este es el caso de la lluvia acida.
. Origen y tipo de los contaminantes: Las sustancias pueden ser de origen natural o
antropogenico. Revise el concepto de antropogenico.
1.4.14 RIESGO Y EVALUACION DEL RIESGO
El termino gpeligrosoh define la capacidad de una sustancia de producir efectos adversos
en los organismos, y el termino griesgoh describe la probabilidad de que, en una situacion
dada, una sustancia peligrosa produzca un dano.
CUIDADO: Note que la expresion tiene un pequeno error en el texto
guia. Tengalo en cuenta. (No pone el Logaritmo del BCF)
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 99
Guia Didactica: Ecotoxicologia
Se dice que una persona se puso en griesgoh, cuando esta gexpuestah a un gpeligroh y la
magnitud del riesgo es una funcion de la peligrosidad de la sustancia y de la magnitud
de la exposicion.
Para que exista un riesgo es necesario que se este expuesto a una sustancia y que esta
exposicion represente un peligro para la salud. Se necesitan tanto el peligro como la
exposicion, si alguno de ellos es igual a cero entonces no hay riesgo.
La toxicidad es una medida del peligro inherente de la sustancia.
La Evaluacion de Riesgo consiste en determinar si es tolerable el riesgo que enfrenta una
poblacion por estar expuesta a toxicos en el ambiente de un sitio contaminado.
La peligrosidad de una sustancia en particular es invariable, pero el riesgo puede
variar ampliamente, dependiendo de las circunstancias. Usualmente se considera que
los volumenes de produccion del agente, las formas de exposicion y la poblacion o
ecosistemas expuestos son los principales criterios que se usan al evaluar un riesgo.
Es interesante revisar los datos estadisticos que se presentan al inicio del capitulo 8 del
texto guia para conocer la problematica actual con los contaminantes toxicos, de tal
modo que es necesario crear criterios para la evaluacion de sustancias toxicas. Cada
region tiene criterios que influyen el proceso de decidir que sustancias evaluar, segun su
problematica particular. Debido a que el estudio toxico de sustancias en algunos casos es
muy costoso se establecio el Principio de Precaucion que dice: Cuando exista la amenaza
de dano grave o irreversible, la falta de pruebas cientificas definitivas no debe usarse
como justificacion para posponer las medidas encaminadas a evitar la degradacion
ambiental y a proteger los ecosistemas. Igualmente, afirma que las acciones ambientales
deben anticiparse a las causas de degradacion ambiental, evitarlas y atacarlas.
1.4.15 CUANTIFICACION DE TOXICOS EN EL ORGANISMO.2
La respuesta toxica en un organo determinado depende de la exposicion de ese organo al
toxico, o sea el dano depende de la concentracion de la sustancia en el organo blanco. Es
evidente que si se desea estudiar cuantitativamente el efecto de los toxicos ambientales
en la salud del hombre es necesario poder estimar la cantidad de toxico que realmente
entro al organismo, estudiar las transformaciones que le hace el metabolismo y las
concentraciones en las que se encuentran las especies toxicas en los distintos organos
del cuerpo.
La estimacion de la concentracion de las especies toxicas en los medios corporales se
puede hacer de dos formas: por medio de muestreo biologico y por el uso de marcadores
biologicos.
- Muestreo biologico: El muestreo biologico o dosimetria interna consiste en la
determinacion cuantitativa de la concentracion del toxico o sus metabolitos en uno
o mas medios corporales del organismo expuesto.
Esta informacion se usa para estimar la exposicion que experimentan cada uno de los
tejidos del cuerpo, con el fin de estimar la magnitud de la exposicion ambiental y para
2 Tornado y adaptado de TOXICOLOGIA AMBIENTAL: Evaluacion de Riesgos y Restauracion Ambiental c 2001 The University
of Arizona http://superfund.phamiacy.arizona.edu/toxamb/
100 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
demostrar que existio una exposicion efectiva. El simple hecho de que el toxico se
encuentre dentro del organismo es la prueba de que existio la exposicion.
El diseno del muestreo biologico consiste en seleccionar el medio biologico que se va
a muestrear, la especie quimica que se debera analizar y el tiempo al que se debera
tomar la muestra. Es necesario asegurarse que las condiciones de muestreo sean las
que proporcionen observaciones de valores representativos del nivel del toxico en e
organismo.
El muestreo de cada medio tiene sus ventajas y desventajas y la seleccion del medio mas
adecuado, en cada caso, dependera del balance entre esas ventajas y desventajas. Los
medios mas comunmente analizados son la orina, la sangre y el cabello.
Orina
En este medio se encuentran los xenobioticos y/o sus productos de excrecion que sean
solubles en agua. El muestreo es muy sencillo, no requiere de procedimientos invasivos
ni de personal especializado. Como la orina es una solucion acuosa homogenea es muy
facil estimar la recuperacion del analizando.
Los cambios en flujo y composicion de la orina influyen sobre la concentracion de las
sustancias en este medio y por lo tanto los resultados se deben de corregir por estos
factores.
Sangre
Factores principales que se consideran al disenar el muestreo.
. Tipo de Exposicion. En el caso de las exposiciones intermitentes el
tiempo transcurrido desde la exposicion es muy importante debido
a que la concentracion del agente puede variar rapidamente con el
tiempo.
La concentracion interna se incrementa al inicio de la exposicion y
despues empieza a disminuir debido al efecto de los procesos de
desintoxicacion del organismo (metabolismo y excrecion). El tiempo transcurrido
no es tan importante si la exposicion es continua, ya que la concentracion del
compuesto estara practicamente constante, cuando se establece el regimen
estacionario.
. Movilidad y metabolismo. Dependiendo de las propiedades fisicoquimicas
y bioquimicas del toxico este se transportara a distintas velocidades hacia los
organos, se acumulara y se transformara a velocidades diferentes en cada uno
de los organos en los que penetro. Si el compuesto original se biotransforma
rapidamente, entonces su concentracion, en los medios biologicos, sera
muy baja y en ese caso es mas significativo seguir la concentracion de sus
metabolitos. El compuesto se puede encontrar en la sangre, acumulado en
grasa, pelo, unas, musculo o hueso, o encontrarse en las secreciones del
organismo (orina, heces, leche, sudor) etc.
. Facilidad de muestreo.- Se prefiere analizar los medios de los que se puedan
obtener las muestras mas facilmente, invadiendo el organismo lo menos
posible. Se prefiere el medio en el que se encuentre la especie quimica relevante
en forma mas facil de analizar.
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 101
Guia Didactica: Ecotoxicologia
Como se menciono anteriormente, la sangre se supone que esta en equilibrio con todos
los organos del cuerpo y, por lo tanto, es el medio que mejor refleja la exposicion de los
diferentes organos en un momento dado.
El factor que mas afecta la representatividad de los resultados del muestreo de sangre
es la distribucion del toxico entre el plasma y las celulas que puede variar con el periodo
de exposicion y el lapso transcurrido desde que sucedio. La distribucion depende
de las propiedades fisicoquimicas del compuesto. Los liposolubles normalmente se
encuentran en las celulas y los compuestos ionizados en el plasma. En cada uno de estos
compartimentos el compuesto se puede encontrar libre o asociado a diferentes ligandos
como proteinas, cloruros, glutation.
El muestreo de sangre requiere de entrenamiento especializado y se deben de varios
cuidados.
Cabello
La mayoria de los compuestos que se incorporan al cabello son los que tienen afinidad por
los grupos sulfhidrilo de la queratina. El cabello crece lentamente, asi que su muestreo no
es adecuado para evaluar exposiciones recientes. Se sabe que solo en una de las fases de
crecimiento del cabello (anagenia) se incorporan los xenobioticos, presentes en el cuerpo, al
eje del cabello y se sabe tambien que la velocidad de crecimiento en esa fase-es de 0.37 mm/
dia. Esta informacion se usa para reconstruir, con buena exactitud, la historia de exposiciones
pasadas por periodos prolongados. Desafortunadamente solo se tienen datos para muy
pocas sustancias que nos permitan estimar el coeficiente de particion sangre-pelo.
El principal problema que se tiene con el muestreo del cabello es la contaminacion
proveniente de fuentes externas como particulas suspendidas en el aire, contaminantes
presentes en el agua, productos de limpieza y cosmeticos.
El muestreo de cabello no es un Procedimiento invasivo.
Otros medios
Se pueden seleccionar otros medios biologicos para tomar muestras, tales como, aire
exhalado (por ejemplo, en la determinacion de alcohol etilico), celulas exfoliadas
de la piel, unas, sudor, saliva, hueso y leche materna. El analisis de leche materna se
utiliza principalmente para estimar exposiciones de infantes, mas que para estimar
concentraciones corporales en la madre.
- Biomarcadores:
Los marcadores biologicos o biomarcadores son los cambios medibles, ya sean estos
bioquimicos, fisiologicos o morfologicos, que se asocian a la exposicion a un toxico. Por
ejemplo; el nivel de colinesterasa en sangre se cambia por la exposicion a plaguicidas.
Un nivel anormalmente bajo de colinesterasa es un biomarcador de la exposicion a
plaguicidas organofosforados.
Los biomarcadores se utilizan para:
. detectar la presencia de una exposicion
. determinar las consecuencias biologicas de la exposicion
. detectar los estados iniciales e intermedios de un proceso patologico
. identificar a los individuos sensibles de una poblacion
. fundamentar la decision de intervenir, tanto a nivel individual como ambiental
En el diseno de una rutina de muestreo es necesario considerar lo siguiente:
. especificidad y sensibilidad del biomarcador
. dificultad de muestreo
. cinetica de la formacion del biomarcador y
102 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
. estabilidad del biomarcador
Los biomarcadores mas utiles son los que se pueden obtener menos invasivamente, por
eso es que se prefieren los que se encuentran en sangre.
A continuacion se describen varios tipos de biomarcadores
Marcadores internos de dosis
Indican que el toxico ha entrado al organismo. Proporcionan informacion cuantitativa
sobre la exposicion y corroboran el ingreso de toxicos al organismo. Son los resultados
de la dosimetria interna, o sea la concentracion de los xenobioticos y sus metabolitos en
los medios biologicos.
Marcadores de dosis biologicamente efectivas
Indican que el toxico ya ha producido danos en el organismo. Son los compuestos de
adicion estables que forman el toxico o sus productos de bioactivacion con los acidos
nucleicos y proteinas.
Cuando se encuentran compuestos de adicion del ADN se puede concluir lo siguiente:
. que el toxico ha llegado a su blanco
. que ha reaccionado con el y que probablemente ha producido una lesion la cual
puede ser reparada o conducir a un dano permanente
Los productos de la bioactivacion normalmente tienen una vida media muy corta y es
dificil medir directamente su concentracion. En este caso se determinan los marcadores
de dosis biologicamente efectivas que producen.
Los compuestos de adicion de hemoglobina y albumina son biornarcadores de dosis
biologicamente efectivas muy convenientes debido a que se pueden obtener facilmente
de la sangre.
Marcadores de respuesta biologica
Representan estados avanzados del proceso de dano. Son mas persistentes y a menudo
representan alteraciones geneticas. Ejemplos de estos son las mutaciones de ciertos
oncogenes y los intercambios entre cromatinas hermanas.
Marcadores de enfermedades
Son manifestaciones preclinicas o tempranas de enfermedades, representan el ultimo
paso antes de que se establezca la enfermedad que produce la exposicion. Los polipos en
el colon son un marcador de enfermedad ya que la continuacion de la exposicion puede
conducir a la generacion de un cancer.
Marcadores de susceptibilidad
Se utilizan para identificar a los individuos mas susceptibles a danos en una poblacion.
Algunos individuos tienen probabilidades mas altas que otros de recorrer completo
el camino exposicion-enfermedad. Esto se puede deber a que tienen mas activos los
procesos de bioactivacion o a que tienen disminuidas sus capacidades de destoxificar, de
excretar o de reparar danos. Ejemplo de un marcador de susceptibilidad es la actividad
de la Nacetiltransferasa (NATI.. Los individuos con una alta actividad NAT tienen un
riesgo mas alto si son expuestos a los compuestos que son bioactivados por NAT (por
ejemplo 2- aminofluoreno).
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 103
Guia Didactica: Ecotoxicologia
1.5 Mutagenesis, Carcinogenesis y Teratogenesis ambiental
INFORMACION IMPORTANTE
Para el estudio de esta seccion estudie los Capitulos 6 y 7 del libro guia y revise tambien
cuidadosamente esta guia, ya que algunos conceptos se introducen o son ampliados.
Las sustancias toxicas naturales son utilizadas por microorganismos, plantas y animales
para defenderse de sus enemigos, como una forma de mantener la vida de la especie.
Muchos estudios han demostrado que la exposicion a ciertas clases de radiacion o de
compuestos quimicos es capaz de modificar el ADN y por lo tanto producir alteraciones
geneticas (mutagenesis), pueden inducir el cancer (carcinogenesis) y tener efectos sobre
el feto (teratogenesis).
MUTAGENESIS
Es el proceso por el que se genera mutacion, o cambio hereditario en el material genetico.
Una gran cantidad de agentes ambientales interactuan con el ADN producen cambios
hereditarios. La mutacion puede ocurrir de manera natural, a frecuencias muy bajas dentro
de las celulas o puede ser inducida por agentes, en donde la frecuencia de mutacion, de
manera general, esta en relacion directa con la dosis del mutageno aplicado.
La mutacion es germinal cuando ocurre en las celulas que generan los espermatozoides
y los ovulos. La mutacion es somatica cuando ocurren en los tejidos no gonadal es no es
transmitida a la descendencia.
La exposicion a mutagenos induce alteraciones en la sintesis de nucleotidos. Por ejemplo,
un par de adenina - timina en una determinada posicion puede ser reemplazado por un
par guanina citosina. Otro tipo de error consiste en insertar o sacar varios nucleotidos.
Estos cambios geneticos se conocen como mutaciones puntuales o microdeleciones y se
diferencia de las macrodeleciones que afectan a numeros grandes de pares de bases o
pueden causar el rompimiento o la reunion de las bandas de ADN.
Las celulas tambien tienen mecanismos de reparacion de ADN, que se pueden agrupar en
dos grupos: reparacion libre de error y reparacion erronea. En la primera se elimina del
ADN los nucleotidos danados o alterados y se restaura la molecula a su forma original.
En el segundo caso no se elimina el dano del ADN, porque la celula presenta tambien
danos en su sistema de reparacion, y causa la replica de los defectos mutagenicos ya
producidos, de tal modo que el error aumenta en la descendencia. Se cree que muchas
de las mutaciones genicas son resultado de la reparacion erronea.
CARCINOGENESIS
Se define como el fenomeno por el que un tejido normal genera el crecimiento de nuevos
tejidos, diferentes al tejido original. A estos nuevos tejidos se les conoce como tumores y
se clasifican en benignos y malignos.
Ocurre por dos causas:
- Efecto de agentes externos
- Predisposicion genetica
Carcinogeno es el agente capaz de aumentar la incidencia de tumores malignos. Los
agentes carcinogenicos se clasifican como organicos e inorganicos.
Leer y estudiar el estudio de caso.
104 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
TERATOGENESIS
La teratologia es el estudio de las alteraciones anatomicas, funcionales o bioquimicas
que son inducidas por agentes ambientales durante el desarrollo embrionario y fetal.
Los principios basicos de la teratologia son:
1. Existe susceptibilidad a teratogenesis en funcion de la madre y el embrion.
2. Para que se inicie la embriogenesis anormal se requiere que los agentes
teratogenicos actuen sobre celulas o tejidos en desarrollo.
3. Las manifestaciones finales de la embriogenesis anormal son malformacion,
retardo, alteraciones funcionales y muerte.
4. Los efectos de los agentes teratogenicos dependen de su naturaleza y de la
dosis.
Las causas son variadas, por ejemplo, las radiaciones ionizantes, los disolventes organicos
y los plaguicidas organofosforados son teratogenicos.
Los mecanismos de accion de estos agentes son: mutacion, rompimiento cromosomico,
interferencia de la mitosis, alteraciones en la integridad y funcionalidad del ADN
Leer y estudiar el estudio de caso. Nig. 98, texto guia.
1. Responda a las siguientes preguntas
a. .De manera general a que se dedica la toxicologia?
b. Diferencie entre toxicidad aguda y cronica
c. Mencione algunas especializaciones de la toxicologia:
d. .De que se conforma un ecosistema?
e. .Como explica el hecho de que naturalmente los rayos UV del sol no lleguen hasta
la superficie terrestre?
f. Que significa que el agua tenga un ciclo atmosferico?
g. Normalmente los procesos causantes de contaminacion atmosferica tienen dos
origenes:
h. .Que es el efecto toxico?
AUTOEVALUACION
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 105
Guia Didactica: Ecotoxicologia
i. Diferencie entre organo blanco y organo critico
j. Diferencie toxicodinamica de toxicocinetica
k. Segun un modelo cinetico de primer orden, .como se comporta la velocidad a la
que procede el ADME con respecto a la concentracion y a la dosis?
1. Haga la representacion de una curva dosis - respuesta
m. Defina peligrosidad e indique cuales son los criterios de peligrosidad que
normalmente se usan en toxicologia.
n. Los medios mas utilizados para realizar muestreo biologico, son:
II. Responda Falso o Verdadero, segun corresponda en el cuadro que aparece al
final de las preguntas.
Ejemplo: Si la pregunta a es Falsa, y la pregunta m es verdadera, se tacha la letra a
y el recuadro que corresponde a m se deja libre
a
m
a. Un xenobiotico, es un agente que pertenece a la esfera natural y que le afecta.
b. La litosfera esta conformada por el agua de la tierra
c. El ciclo del carbono es un ciclo atmosferico
d. Un contaminante es ecotoxico, cuando afecta al ecosistema que le rodea.
e. En ecotoxicologia se denomina exposicion a la forma en que ocurre el contacto
entre el agente toxico y el organismo
f. En la interaccion de sustancias quimicas, el efecto aditivo es cuando el resultado
combinado de dos agentes quimicos es mucho mayor que la suma de los dos.
g. Una vez que un toxico, ha alcanzado el torrente sanguineo, este se distribuye
lentamente.
h. La biotransformacion consiste fundamentalmente en la conversion de toxicos en
sustancias mas daninas para los tejidos y organos de los seres vivos.
i. En las reacciones de biotransformacion fase II generalmente se obtienen sustancias
mas polares que en las reacciones de la fase I.
106 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
j. La Excrecion de las sustancias quimicas toxicas se hace generalmente por los
rinones, con las heces fecales y por los pulmones.
k. La vida media de un toxico es el tiempo que tarda en reducirse a la mitad la
concentracion del mismo.
l. La relacion dosis - efecto es la que existe entre la dosis administrada y la severidad
de un efecto especifico.
m. La relacion dosis - respuesta es la que existe entre la dosis administrada y el numero
de individuos que presentan efectos.
n. La DL50 es la dosis a la cual el 50% de la poblacion genera una respuesta al aplicar
un toxico
o. El Principio de Precaucion dice que cuando la no existencia de pruebas cientificas
definitivas justificaran el hecho de considerar una sustancia potencialmente toxica
como inocua.
p. La mutacion es germinal cuando se realiza sobre tejidos que no se transmiten a la
descendencia
q. Se habla de carcinogenesis cuando un tejido normal genera el crecimiento de
nuevos tejidos, distintos al original.
a b c d e f g h i J
k i m n o p q
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 107
Guia Didactica: Ecotoxicologia
2.1 CONTAMINANTES ATMOSFERICOS
La contaminacion atmosferica es una de las principales formas de contaminacion, ya que
el medio por la que se difunde (el aire) llega rapidamente a cualquier lugar del ecosistema.
La causa de contaminacion mas tipica por este medio, desde tiempos inmemorables es la
quema de combustibles.
2.1.1 ATMOSFERA
La atmosfera es la envoltura gaseosa que envuelve a la Tierra, y el aire forma parte de
ella. Los dos terminos normalmente se refieren a lo mismo.
La atmosfera tiene una altura de 2000 km y esta dividida en capas arbitrarias, segun su
funcionalidad.
Figura 2.1 Capas de la atmosfera terrestre
El aire es una mezcla de nitrogeno, oxigeno, argon, bioxido de carbono, otros gases
inertes y vapor de agua.
En la atmosfera el movimiento de los vientos, los cambios de temperatura y de humedad
en el ambiente, pueden modificar el comportamiento de las sustancias presentes en el aire.
Capitulo 2: Contaminacion Atmosferica
Para el estudio de este capitulo se utilizara como base los capitulos
9 y 10 (Pags. 123 a 174) de Albert, L. Introduccion a la toxicologia
ambiental. Primera Edicion. CEPIS / OPS, Mexico, MX, 1997, y las
recomendaciones de trabajo propuestas en esta guia didactica.
Ionosfera
Mesosfera
Estratosfera
Troposfera
Tierra
T= 500 - 1200o C
N2 y O2 absorben
la energia de la luz
UV
T= 70o C
Disminuye el
O3
T= 15 - 56oC
donde vivimos
T= 2o C
Lugar del O3
Absorbe UV
e IR
108 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
2.1.2 CONTAMINACION ATMOSFERICA
La definicion de contaminacion atmosferica del libro guia es la siguiente:
La contaminacion atmosferica es la presencia de sustancias, organismos o formas de energia en
ambientes aereos a los que no pertenecen, o en cantidades superiores a las propias cuando ese
es su sustrato natural, por un tiempo suficiente, y bajo condiciones tales, que interfieran con la
salud y la comodidad de las personas, danen o alteren los recursos naturales o alteren el equilibrio
ecologico de la zona.
- CLASIFICACION DE CONTAMINANTES
- Segun las caracteristicas quimicas del contaminante
- Segun las caracteristicas fisicas del contaminante
- Efectos
- Fuentes de produccion o emision
Contaminantes primarios: Las sustancias se encuentran tal como fueron emitidas a la
atmosfera.
Contaminantes secundarios: Interaccion de varios contaminantes primarios.
2.1.3 CONTAMINANTES PRIMARIOS
En el cuadro se muestra una clasificacion especifica para contaminantes atmosfericos
Figura 2.2 Clasificacion de los contaminantes atmosfericos
ACTIVIDAD SUGERIDA
Para comprender mejor el efecto de inversion termica, realice un
esquema con la descripcion que se da en el texto guia.
CONTAMINANTES
PRIMARIOS
Fuente Natural
Emisiones, azufre
Fuente Antropogenica
Actividades industriales
Fuente Fijas
Procesos industriales
Fuente moviles
Automoviles
MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA La Universidad Catolica de Loja UTPL 109
Guia Didactica: Ecotoxicologia
Los principales contaminantes primarios y sus efectos se resumen en los siguientes
graficos:
CARACTERISTICA
DEL CONTAMINANTE
PRINCIPALES
EFECTOS
Particulas Suspendidas:
Sustancias solidas y liquidas
suspendidas o dispersas.
- Particulas solidas
(Diametro = 0.005 - 200
micras). Ca, Mg, Si
- Particulas liquidas:
-.......... ......... Aerosoles
Las fuentes principales son las
fabricas de hierro y acero,
papel, rocas, minerales
Particulas Suspendidas:
Funcion respiratoria. Efecto
irritante sobre el tracto
respiratorio.
Sinergia entre las particulas
y algunos compuestos
quiricos.
Oxidos de azufre:
S02 = bioxido de azufre o
anhidrido sulfuroso.
Origen: combustion de
combustibles fosiles c o m o
azufre, calcinacion de
minerales sulfuros, refinacion
del petroleo, produccion de
H2SO4 y coque, refinacion de
minerales, H2S de material
organica
2SO2 + O2 ¨ 2SO3
Generacion de lluvia acida
Oxidos de Azufre
- Es inspirable, se
transforma en acido
- sulfurico y sulfatos.
- Dano a partir de 3 ppm
en aire.
Bioxido de carbono (C02):
Combustion de sustancias que
contengan carbono.
Combustion de hidrocarburos.
Bioxido, de carbono:
Desequilibrio en la
atmosfera
Efecto invernadero
110 UTPL La Universidad Catolica de Loja MODALIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA
Guia Didactica: Ecotoxicologia
CARACTERISTICA DEL
CONTAMINANTE
PRINCIPALES EFECTOS
Monoxido de carbono (CO):
Combustion incompleta de
hidrocarburos. Principal fuente
de emision: transporte
Monoxido de carbono
(CO): Toxico agudo. El CO
compite con el O2 para la
formacion de oxihemoglobina
o carboxihemoglobina. Se
reduce la capacidad de
transporte de oxigeno y es
una reaccion severamente
irreversible
Oxidos de Nitrogeno (NO y
NO2):
Monoxido de nitrogeno dioxido
de nitrogeno. Alguna bacterias
generan NOx de fuente natural.
Fuente antropogenicas: Planta
generadoras de energia electrica,
automoviles. Se convierten en
acido nitrico, nitratos
Oxidos de Nitrogeno (NO y
NO2): Limites en humanos:
0. 1 - 4 ppm Mecanismos
irritativos pulmonares.
Provoca bronquiolitis, edema
pulmonar, alteraciones
enfisematosas, etc.
Hidrocarburos:
Constituyentes mas importantes
de la gasolina Fuentes: tubos de
escape evaporacion de
pinturas evaporacion directa d e
combustibles.
Hidrocarburos:
No existe evidencia de dano
agudo. Pero hay evidencias de
danos cronicos, por ejemplo
con algunos hidrocarburos
aromaticos.
Los principales contaminantes secundarios y sus efectos se, resumen en los siguientes
graficos:

No hay comentarios:

Publicar un comentario